Genomica e bioterrorismo | medicina/scienza
Andrea Salvatore Buffa Denunce Pubbliche
Read in the Substack app
Via Vita 12, Petro SioN TP 91020 Italy
De la liberté, John Stuart Mill
Apr 29, 2024
The HOLY BIBLE
https://holy-bible.webnode.page/
Andrea Salvatore Buffa Denunce Pubbliche 02.03.1973 PALERMO
Via Vita 12, Petro SioN TP 91020 Italy
HOMEPAGE
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/homepage-from-god
ASTENERSI DAI fArmAci e dal rivotarli
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/astenersi-dai-farmaci-e-dal-rivotarli
La magistratura, una farsa della CIA di Hollywood
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/la-magistratura-una-farsa-della-cia
La Verità vi accusa di complicità
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/la-verita-vi-accusa-di-complicita
יהודי 中国人 ITALIANO ENGLISH ESPAÑOL
UNIVERSAL bEst TOOLS DESIGN
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/universal-best-tools-design
AndreaSalvatoreBuffa@yandex.com
In caso di donazione, un'offerta ti farebbe onore, un euro, non ti chiedo di più.
PAYPAL
Carta numero:
5313 6400 4550 0349
Iban
FR76 1659 80000 1170 468 2000 159
HOMEPAGE From GOD!(19).PDF
02 Jun 2024
Georgia Meloni al G20 di Nuova Delhi la scorsa settimana, una mancanza di controllo, troppa cocaina_-360p-(www.KeepVid.to).mp4
Benjamin Netanyahu è Milkowski ed è polacco
בנימין נתניהו הוא מילקובסקי והוא פולני
Benjamin Netanyahu is Milkowski and he is Polish
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/3a9
Italiano
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/benjamin-netanyahou-est-milekowski
Leggi Esodo 20 e Levitico 18, il Vaticano è stato sempre satanico!
https://www.biblestudytools.com/riv/passage/?q=esodo+20;levitico+18
Dietro a Washington o a Roma o a Paris, ecc, c'è city London, Apocalisse 17 e 18
THE ARAB/ENGLISH OFFENSIVE IN ISRAEL AND WORLD WARS!
L'OFFENSIVA ARABA/INGLESE IN ISRAELE E LE GUERRE MONDIALI!
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/loffensivaarabainglese-in-israele
Presentiamo il conto a Prodi e al PD che ci ha infinocchiati. Quindi per Fatti gravissimi di Aggiotaggio che in aggiunta alla segregazione malata, folle, senza senso come codeste losche figure a comparsa, a proposito, Occhetto e Bertinotti?
Quindi, STOP A SPESE PAZZE, STOP ARMAMENTI CONTO TERZI, STOP DEBITO PUBBLICO UNIVERSALE. GIUBILEO!
Lo Stato è MAFIA e tutti i dipendenti delle sanguisughe lgbt
The State is MAFIA and all the employees of the lgbt leeches
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/the-state-is-mafia-and-all-the-employees
FREE *.PDF DE LUKCA
Vincenzo De Luca_ mando i carabinieri con il lanciafiamme!(1).PDF
Esenzione Cristiana, esenzione di fede e tante Rivelazioni apocalittiche
Petrosino, le Nazioni Unite in Giacomo Anastasi @mettere in evidenza Israeli Navy זרוע הים
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/petrosino-le-nazioni-unite-in-giacomo
VACCINI, DENUNCE PUBBLICHE di Andrea Salvatore Buffa
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/vaccini-denunce-pubbliche-di-andrea
NICE ATTENTATO, MARSEILLE ATTENTATO: IO C'ERO e DIO MI HA TRATTO IN SALVO!
Denuncia e Querela ecc
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/denuncia-e-querela-nice-attentato
Truffa mediaTica medicaMEnte $
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/truffa-mediatica-medicamente
VACCINI, DENUNCE PUBBLICHE di Andrea Salvatore Buffa,
QUESTO DOCUMENTO DI UNA ESTREMA VERITÀ, CON TUTTI I PUNTI FOCALI E NODALI SULLA PAGLIACCIATA SATANICA DEI SATANISTI CHE CI GOVERNANO, GOVERNA BO! TUTT’OGGI!
6 JUN 2024
ESPOSTE PIÙ VOLTE AD UNA MOLTITUDINE DI PROCURE ITALIANE, E A UNA MOLTITUDINE DI AVVOCATI, E ALLE MOLTITUDINI DI FRANCESCani dei MEDIA VIA WEB! NONCHÉ A FILOSOFI CIECHI, È OVVIO! INVIATA A UNA MOLTITUDINE DI GIORNALIsti, ad una lista di 400 contatti email, ad una MOLTITUDINE di BLOGGERS, A RADIO RADIO, FORZE ARMATE, MINISTRI E MINISTERI, COMUNI, ECC, SOCIAL.. . A CANCELLERI DEL M5S! ECC.
.
SCARICA TUTTO IL SITO
DOWNLOAD THE ENTIRE SITE
11 Jun 2024
Vittime di MAFIA!
protocollovittimemafia@pec.interno.it
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/vittime-di-mafia
Chat WhatsApp Giuseppe Buffa
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/chat-whatsapp-giuseppe-buffa
.
ג'יאני ד'אגוסטינו מכפיש אותי בפומבי בלי בושה!
Gianni D'agostino mi diffama pubblicamente senza pudore!
Gianni D'agostino defames me publicly without shame!
Gianni D'agostino me diffame publiquement sans honte !
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/gianni-dagostino-mi-diffama-pubblicamente
Francesco Taglietti chat skype 2
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/francesco-taglietti-chat-skype-2
.
Giuseppe Pellegrino chat
Qualcuno ha scritto questo (copio incollo)
"Che peccato. Un essere così gioioso e generoso rinchiuso in un delirio paranoide. Avesse almeno la fortuna di capire che ha bisogno di aiuto."
Mi dai il link per sapere chi ha osato scrivere ciò?
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/giuseppe-pellegrino-chat
Comune di Petrosino news ed Uffici!
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/comune-di-petrosino-news-ed-uffici
All'Attenzione degli Illustrissimi Signori della Corte dei Conti, dei Procuratori della Repubblica, ecc.
13 Lug 2023
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/allattenzione-degli-illustrissimi
Questo è l'inferno 2.a
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/questo-e-linferno-2a
CURRICULUM VITAE (It)
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/curriculum-vitae-it-2
CURRICULUM VITAE (En)
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/curriculum-vitae-en-2
Il raffreddore è un virus o una maldestra esposizione al freddo di un corpo malnutrito?
Chat-WhatsApp-con-Pino-Buffa.docx
Chat WhatsApp con Pino Buffa.txt
723d0b7c-f595-4e0a-a66b-51e1af56fbd7_640x1351(1).webp
Screenshot_20240610_151852_Firefox.jpg
Avv. Paolo Pellegrino Marsala Andrea Salvatore Buffa May 26, 2024
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/avv-paolo-pellegrino-marsala
Via Vita 12, Petro SioN TP 91020 Italy
Avv. Paolo Pellegrino Marsala
·
26 mag
ילד האלוהים נושע בחסד
Il figlio di Dio è salvato per grazia
神的孩子因恩典得救
The child of God is saved by grace
L'enfant de Dieu est sauvé par la grâce
2 Marzo = Sofonia 1:10 è il santo Natale
.
Avv. Paolo Pellegrino Marsala Andrea Salvatore Buffa May 26, 2024
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/avv-paolo-pellegrino-marsala
Via Vita 12, Petro SioN TP 91020 Italy
Avv. Paolo Pellegrino Marsala
·
26 mag
Violenza psicologica da partner intimo: cos’è e come si manifesta | Save the Children
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/violenza-psicologica-da-partner-intimo
Exodus 3; 2 Kings 16; 2 Chronicles 24; Matthew 1; Mark 3:33-35; John 7; John 13:12-20; Revelation 22:20-21
ITALIANO
Esodo 3; 2 Re 16; 2 Cronache 24; Matteo 1; Marco 3:33-35; Giovanni 7; Giovanni 13:12-20; Apocalisse 22:20-21
I AM THE EXPECTED CHRIST!
אני המשיח המצופה!
我是所期待的基督!
IO SONO IL CRISTO ATTESO!
JE SUIS LE CHRIST ATTENDU!
¡YO SOY EL CRISTO ESPERADO!
ICH BIN DER ERWARTETE CHRISTUS!
أنا المسيح المنتظر!
Я ЕСМЬ ОЖИДАННЫЙ ХРИСТОС!
मैं अपेक्षित मसीह हूँ!
私は期待されているキリストです!
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/i-am-the-expected-christ
Un gran fracasso dalle colline Sofonia 1:10
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/un-gran-fracasso-dalle-colline-sofonia-110
Napoli Franci 23/05/2024
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/napoli-franci-23052024
ASTENERSI DAI fArmAci e dal rivotarli
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/astenersi-dai-farmaci-e-dal-rivotarli
La magistratura, una farsa della CIA di Hollywood
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/la-magistratura-una-farsa-della-cia
La Verità vi accusa di complicità
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/la-verita-vi-accusa-di-complicita
De la liberté, John Stuart Mill
של חופש,
自由的,
Of freedom,
Der Freiheit,
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/de-la-liberte-john-stuart-mill
.
PEDOFILI MILITARI 3
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/pedofili-militari-3
.
MAGISTRATO PAOLO FERRARO E LA PEDOFILIA MILITARE! https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/magistrato-paolo-ferraro-e-la-pedofilia
.
Satanism gates technology is able to vaccinate with insects.
La tecnologia dei cancelli del satanismo è in grado di vaccinare con gli insetti.
טכנולוגיית שערי השטניזם מסוגלת לחסן בחרקים.
Dec 27, 2022
.
Attali in 2009: a pandemic will establish a world government
Jan 29, 2023
.
Giovanni 8:32 conoscerete la verità e la verità vi farà liberi. Il Vaticano è sempre stato ANTICRISTO = John 8:32 you will know the truth and the truth will set you free. The Vatican has always been ANTICHRIST =יוחנן 8:32 איר וועט וויס
Andrea Salvatore Buffa
Feb 25, 2021
Bill Gates lancia il microchip “2020/666”: Controllerà la popolazione che produrrà criptovaluta, di Daniele Manca
May 20, 2020
.
WUHAN, Roberto Speranza e Bill Gates, Domenico Arcuri e Nicola Zingaretti, due dei finanziatori del vaccino Reithera. By Gospanews
May 10, 2021
.
The WHO want kill us
ארגון הבריאות העולמי רוצה להרוג אותנו
L’OMS vuole ucciderci
L'OMS veut nous tuer
Jan 11, 2023
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/the-who-want-kill-us
.
Glaxos mith k line להרוג!
Glaxo Smith Kline to kill!
Glaxo sm ith kli ne da uccidere!
Glaxo sm ith kl ine à tuer !
葛兰素史克要杀了!
Глаксосмитклайн, чтобы убить!
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/glaxo-smith-kline-to-kill
.
.
Aerosmith
facciamo chiudere WHO, OMS, sta per adottare il Trattato pandemico,
Sep 29, 2022
.
Satanism gates technology is able to vaccinate with insects.
Dec 27, 2022
.
La technologie gates satanique est capable de vacciner avec des insectes.
Dec 27, 2022
Attali in 2009: a pandemic will establish a world government
Jan 29, 2023
Diego Fusaro il Vero GIORNALISTA COME ME SUBISCE ATTENTATI E HA AVUTO CHIUSI TUTTI GLI ACCOUNTS E BLOCCATO CARTE, E 30 E PIÙ SITI CHIUSI!
SONO SCAMPATO PER MANO DI DIO AGLI ATTENTATI DI FRANCIA A NIZZA, E A MARSEILLE.
IN QUESTI DUE ULTIMI MESI DEGLI ESSERI CON I QUALI CONDIVIDO GLI SPAZI, SI SONO ACCOLTELLATI 2 VOLTE. MA LO STATO LI RILASCIA LA SERA STESSA!
UN MIO AMICO È STATO AVVELENATO ED È MORTO. SONO CIRCONDATO DA GEORGIANI MANDATI DA PUTIN, DA FRANCESI MANDATI DA MACRON, DA ALBANESI MANDATI DA MALTA, DA MAROCCHINI MANDATI DAI SAUDITI. NON È SEMPLICE. INOLTRE UNA TANICA MILITARE CON BENZINA ERA A 60 METRI DALLA MIA PICCOLA CAPANNA!
.
Francesco Miglino
PERCHÉ I NON VACCINATI SONO IN PERICOLO?
WHY ARE THE NON VACCINATED IN DANGER?
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/why-are-the-non-vaccinated-in-danger
.
Insects as weapons of destruction
Feb 07, 2023
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/insects-as-weapons-of-destruction
That's why they want us to eat bugs
Ecco perché vogliono che mangiamo insetti
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/thats-why-they-want-us-to-eat-bugs
.
גנומיקה וביוטרור | רפואה/מדע
Genomica e bioterrorismo | medicina/scienza
基因组学和生物恐怖主义| 医学/科学
Génomique et bioterrorisme | médecine/sciences
Genomik und Bioterrorismus | Medizin/Wissenschaft
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/genomica-e-bioterrorismo-medicinascienza
.
Diego Fusaro Napoli Franci Marco Della Luna Radio Radio Paolo Ferraro Radio Roma Max Panicola Radio FN Riccardo Radi Paolo Ferraro Sette Israeli Navy זרוע הים @mettere in evidenza Israel SG Israel Hayom ישראל היום Israele in Italia Israel nas Notícias Megabu Israel Lencha MARSALA FORUM Marsala notizie Trapani-Erice e dintorni... AEROPORTO TRAPANI/ MARSALA LIVE TUTTA LA SICILIA.
Francesco Carrino Attenzione, qui dice che la vaccinazione ai no vax si fa dopo il TSO
Andrea Salvatore Buffa
Aug 18, 2021
Il vaccino è un arma a tempo. Per strategia ancora devono vaccinare i militari;
A settembre col primo lockdown inizieranno militarmente a fare TSO a persone appunto scomode e no vax.In Francia molti degli oppositori, gilet gialli sono stati imprigionati e drogati dal sistema TSO.
Anche la Bibbia parla di una grande riduzione della popolazione mondiale negli ultimi tempi e da delle raccomandazioni come fuggire dalle città.
_
Qui dice che la vaccinazione ai no vax si fa dopo il TSO
CONSENSO INFORMATO e TSO
Il Trattamento Sanitario Obbligatorio può essere richiesto per pazienti che:
non hanno coscienza del proprio stato di malattia;
si oppongono alle cure necessarie con ricadute sulla collettività, come il rifiuto delle vaccinazioni obbligatorie.
Scopro adesso che la pagina è stata cancellata.
NON DIMENTICATE CHE COMBATTIAMO CONTRO SAtANA e i suoi figli bestiali, sinistri, mentitori di professione
The Federal Government Is TRACKING Unvaccinated People!
DECRETO LEGISLATIVO 10 Marzo 2023, n. 24
Attuazione della direttiva (UE) 2019/1937 del Parlamento europeo e del Consiglio, del 23 ottobre 2019, riguardante la protezione delle persone che segnalano violazioni del diritto dell'Unione e recante disposizioni riguardanti la protezione delle persone che segnalano violazioni delle disposizioni normative nazionali. (23G00032)
(GU n.63 del 15-3-2023)
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/decreto-legislativo-10-marzo-2023
.
Marco Della Luna Virginie Joron Les Patriotes Radio Radio @mettere in evidenza Israeli Navy זרוע הים
EcoSimia, economy of sowing and scholastic storytelling
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/ecosimia-economy-of-sowing-and-scholastic
Dialogo con un padre, 10 Jan 2024 – Andrea Salvatore Buffa Denunce Pubbliche
https://andreabuffapetrosino7.wordpress.com/2024/01/10/dialogo-con-un-padre-10-jan-2024/
Exodus 20 App
https://nucleapp.com/app/6582b66b12b7696f0344ce79
Perché non condividete? Non vi capisco
https://www.facebook.com/share/p/dXB7oMM8NZ8UFV7C/
.
Chat whatsapp con Ezio Teresi 04/07/2023
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/chat-whatsapp-con-ezio-teresi-04-07-2023
DITEMI SE QUESTA È VITA!
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/ditemi-se-questa-e-vita
LETTERA DRAMMATICA DI PRIMO ANNO AL FRATELLO MINORE
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/lettera-drammatica-di-primo-anno
Rossella Buffa email 14/04/2021
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/rossella-buffa-email-14-04-2021
Dialogo con un padre, 10 Jan 2024
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/dialogo-con-un-padre-10-jan-2024
Richiesta di sponsorizzazione del design del concittadino Andrea Buffa
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/richiesta-di-sponsorizzazione-del
SOTTO LA MORSA DELL’INGIUSTIZIA, DELL’OMERTÀ
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/sotto-la-morsa-dellingiustizia-dellomerta-583
Gli antiCRISTO, immorali estremisti sinistri guerrafondai ci attaccano
Clamoroso: il diabetologo Mario Sammartano dall’ASL 9 di Trapani che ha diagnosticato erroneamente l’Alzheimer fa lo Psichiatra
Ciao, Sono GRAZIELLA FAZIO MARSALA
COSA NON SI FA PER LA PENSIONE, DA DENUNCIA
giovedì 10 marzo 2016
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/ciao-sono-graziella-fazio-marsala
DENUNCIA PER MAFIA CONTRO GASPARE GIACALONE
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/denuncia-per-mafia-contro-gaspare
PETROSINO, DEI 19 MILIONI CI SONO TANGENTI E PROMOZIONI
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/petrosino-dei-19-milioni-ci-sono-677
Alla cortese attenzione del medico Responsabile Dr. Mario Sammartano
Andrea Salvatore Buffa
Feb 25, 2022
POSTA PEC CERTIFICATA: Alla cortese attenzione del medico Responsabile Dr. Mario Sammartano ASL Trapani
20/12/2021
Cordialmente,
Andrea Salvatore Buffa
Un diabetologo con licenza di psichiatra può uccidere
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/un-diabetologo-con-licenza-di-psichiatra-puo-uccidere
Whatsapp con Dr. Hector (Roma - Albania - Toronto sister)
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/whatsapp-con-dr-hector-roma-albania
DITEMI SE QUESTI SONO PASTORI ! !
Parametric plagins modeling in Rhino 3D
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/parametric-plagins-modeling-in-rhino
Exodus 20; Leviticus 18
https://www.biblestudytools.com/bbe/passage/?q=exodus+20;leviticus+18
Esodo 20; Levitico 18
https://www.biblestudytools.com/riv/passage/?q=esodo+20;levitico+18
Chat WhatsApp con Andrea Marino Pastore Marsala
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/chat-whatsapp-con-andrea-marino-pastore
Chat WhatsApp con Giacomo SPANÒ 1&2
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/chat-whatsapp-con-giacomo-spano-1
Twitter ha soppresso informazioni VITALI sulla TRUFFA COVID!
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/twitter-ha-soppresso-informazioni
a FuSArO: Intendeva che la GIUSTIZIA non esiste. Matteo 11:12 Dai giorni di Giovanni il battista fino a ora, il regno dei cieli è preso a forza e i violenti se ne impadroniscono. Una CORAGGIOSA DENUNCIA DI SARA CUNIAL
COOP: rimuovete questo libro per bambini che promuove materiale osceno!
L'ultima possibilità per fermare il Trattato Pandemico dell'ONU: la petizione da 3 milioni di firme
Radio Radio, Infame Pezzente! DENUNCE NE AVETE MAI FATTE? SIETE IN TANTISSIMI GIUSTO?
AVRESTE DOVUTO INFORMARE PER TEMPO! COME IO INFORMANDO VOI VI HO SALVATI !
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/radio-radio-infame-pezzente
Enrico Michetti e amichetti LGBTQ
Dico:
FATE PRIMA A DRAGARE L’EstuariO !!
ED AD ARRESTARE CHI DICE DI AVERLO FATTO !
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/enrico-michetti-e-amichetti-lgbtq
Proverbi 11
Napoli Franci
Napoli Franci 25/05/2024 L’Avvocato Tiziana Teodosio è la sorella assassina in quanto medico!
Israeli Navy זרוע הים
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/napoli-franci-25052024
@mettere in evidenza Paolo Ferraro Paolo Ferraro Sette Segnalate A Palermo Diego Fusaro Marco Della Luna Francesco Miglino
Avv. Giuseppe Sottile
.
Doctors received billions to KILL!
I medici hanno ricevuto miliardi per UCCIDERE!
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/doctors-received-billions-to-kill
.
IA Act, regolamento sull'intelligenza artificiale
La sintesi è elaborata completamente con chatGPT.
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/ia-act-regolamento-sullintelligenza
.
GIUDICI FALCONE E BORSELLINO, DI PIETRO E CHI ALTRI?
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/giudici-falcone-e-borsellino-di-pietro
Sir. PUTIN, WHY NOT?
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/sir-putin-why-not
JULIAN ASSANGE HONORARY PRESIDENT OF ENGLAND!
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/julian-assange-honorary-president
FAUCI, Dr. Morens, who is your FOIA lady? Is it Hillary Clinton?
FAUCI, Dottor Morens, chi è la sua signora FOIA? È Hillary Clinton?
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/fauci-dottor-morens-chi-e-la-sua
DEMOCRAZIA = la multiforme lobbying
https://andreasalvatorebuffa2.substack.com/p/la-democrazia-lobbying-e-multiforme
a FuSArO: Intendeva che la GIUSTIZIA non esiste. Matteo 11:12 Dai giorni di Giovanni il battista fino a ora, il regno dei cieli è preso a forza e i violenti se ne impadroniscono. Una CORAGGIOSA DENUNCIA DI SARA CUNIAL
.
.
Original *.pdf
Genomica e bioterrorismo | medicina/scienza
Génomique et bioterrorisme | médecine/sciences
.
Search Menu
Home All issues Volume 19 / No 10 (Octobre 2003) Med Sci (Paris), 19 10 (2003) 967-971 Full HTML
Free Access
Med Sci (Paris) 2003 ; 19 : 967–971Génomique et bioterrorisme
Genomics and bioterrorism
Maurice Boissinot et Michel G. Bergeron*
Centre de recherche en infectiologie de l’Université Laval, Centre Hospitalier Universitaire de Québec (Pavillon CHUL) et Division de microbiologie, Faculté de.Médecine, Université Laval, 2705, boulevard Laurier, Sainte-Foy, Québec, G1V 4G2 Canada
* Michel.G.Bergeron@crchul.ulaval.ca
Menù di ricerca
Home Tutti i numeri Volume 19 / No 10 (ottobre 2003) Med Sci (Parigi), 19 10 (2003) 967-971 Full HTML
Articolo precedente Articolo successivo
Accesso libero
Med Sci (Parigi) 2003; 19: 967–971 Genomica e bioterrorismo
Genomica e bioterrorismo
Maurice Boissinot e Michel G. Bergeron*
Centro di ricerca infettiva dell'Università di Laval, Centro ospedaliero universitario del Quebec (padiglione CHUL) e Divisione di microbiologia, Facoltà di medicina, Università di Laval, 2705, boulevard Laurier, Sainte-Foy, Quebec, G1V 4G2 Canada
* Michel.G.Bergeron@crchul.ulaval.ca
riassunto
I recenti attacchi terroristici che hanno utilizzato spore di Bacillus anthracis hanno messo in luce le carenze delle agenzie di sanità pubblica. Tuttavia, l’uso dei batteri come arma non è una novità e dovremo sviluppare la nostra capacità di affrontarlo. È importante sviluppare nuovi metodi diagnostici molecolari per identificare i batteri in meno di un’ora. Il nostro laboratorio utilizza la genomica per creare strumenti che promettono di rivoluzionare la medicina.
Astratto
L'uso di armi biologiche è stato documentato nel corso della storia. Tuttavia, le lettere contaminate dall’antrace dell’autunno del 2001 causarono shock e panico in diversi paesi. La conoscenza delle principali armi batteriologiche consente la progettazione di nuovi test diagnostici rapidi basati sul DNA che dovrebbero aiutare a disinnescare l'impatto dei futuri attacchi bioterroristici. L’identificazione tramite PCR in tempo reale dei batteri e dei geni di resistenza agli antibiotici ad essi associati rivoluzionerà la pratica della medicina in meno di un’ora.
© 2003 medicina/scienze - Inserm / SRMS
Armi biologiche nella storia
Le lettere contaminate dall'antrace nell'autunno del 2001 non furono i primi attacchi effettuati con armi biologiche. Infatti, non appena gli esseri umani hanno potuto osservare la natura trasmissibile di alcune malattie, hanno utilizzato le loro conoscenze per scopi bellici. Nell'antichità si trattava di strategie semplici, come contaminare i pozzi dei nemici con cadaveri di animali. Successivamente si approfondiscono le conoscenze sulle infezioni; ad esempio, nel terzo canto delle Georgiche, Virgilio presenta una descrizione molto vivace e poetica dell'antrace negli animali e della sua trasmissione all'uomo attraverso l'uso di lana e pelli contaminate. Successivamente Koch formulò i suoi famosi postulati in seguito alle sue osservazioni sulla trasmissione di questa infezione. Nel XIV secolo i tartari tentarono di diffondere la peste nella città assediata di Kaffa catapultando i cadaveri degli appestati oltre i bastioni. Durante la rivolta guidata dal capo dei nativi americani Pontiac (1763), il comandante inglese Sir Jeffrey Amherst fece distribuire coperte contro il vaiolo alle popolazioni native americane. Durante la prima guerra mondiale la Germania effettuò numerosi attacchi biologici contro gli alleati. Una spia tedesca tentò addirittura di contaminare le mandrie di renne utilizzate come bestie da soma per il trasporto di armi tra la Norvegia e la Russia. Le spore di Bacillus anthracis sequestrategli hanno potuto essere resuscitate dopo più di ottant'anni di stoccaggio nei locali del Museo della Polizia di Trondheim [ 1 ]. Durante la Seconda Guerra Mondiale, gli Alleati svilupparono diverse armi batteriologiche il cui sviluppo accelerò durante la Guerra Fredda, soprattutto negli Stati Uniti e nell'Unione Sovietica [ 2 ].
I batteri considerati armi biologiche
Questa breve storia ci ricorda che il Bacillus anthracis non è l’unico microrganismo che potrebbe essere utilizzato come arma biologica. Teoricamente, più di 250 agenti patogeni potrebbero servire agli scopi dei terroristi [ 3 ]. Tra questi troviamo principalmente batteri e virus. Tuttavia, i batteri sono preferiti dai terroristi perché generalmente sono più facili da ottenere e più semplici da diffondere.
Per affrontare la minaccia delle armi biologiche, le agenzie governative di diversi paesi hanno stabilito elenchi gerarchici di potenziali armi. L’ordine di priorità dei microrganismi varia leggermente a seconda delle prospettive delle diverse parti interessate. Sulla base di criteri che determinano il livello di preparazione e lo sforzo richiesto per affrontare la minaccia microbiologica, i Centri americani per il controllo delle malattie (CDC) dividono gli agenti patogeni in tre categorie [ 4 ] (Tabella I) . Gli agenti di categoria A sono quelli che potrebbero causare effetti maggiori sulla salute pubblica e colpire il maggior numero di vittime. Gli agenti di categoria B hanno il potenziale per una diffusione su larga scala, ma la morbilità e la mortalità che potrebbero causare sono meno significative di quelle causate dagli agenti di categoria A. Infine, i microrganismi di categoria C sono considerati una minaccia emergente.
Proprietà delle armi batteriologiche, elencate dalla minaccia più alta (+++) alla minaccia più bassa (–). PD: potenziale di produzione e rilascio in quantità sufficienti a colpire una vasta popolazione, determinato in base alla disponibilità, ai requisiti di coltivazione, alla via più probabile di infezione e alla stabilità ambientale; PP: trasmissibilità da persona a persona; O si; N: no; E: in corso. 1. Percezione pubblica della pericolosità di queste infezioni; 2. Livello di preparazione speciale richiesto dai laboratori di sanità pubblica per affrontare queste infezioni; 3. Categoria di priorità secondo i CDC ( centri per il controllo delle malattie ). A: agenti con il potenziale più dannoso; B: agenti con potenziale significativo ma percepiti come più semplici da controllare; C: agenti emergenti; 4. Struttura minima richiesta per fungere da arma biologica completamente virulenta (adattato da [ 4 ])
Va notato che diversi batteri di categoria B, come Vibrio cholerae , Escherichia coli enteropatogeno , shigella e salmonella, sono principalmente trasmissibili attraverso il cibo e l'acqua. È necessario effettuare un controllo più rigoroso di queste fonti di contaminazione per evitare disastri [ 5 ]. Sebbene le malattie causate da questi agenti patogeni enterici siano generalmente limitate, possono essere fatali. Va ricordato che l'attacco bioterroristico che ha fatto finora il maggior numero di vittime, almeno 751 persone, è stato compiuto nel 1984 da un gruppo estremista religioso in Oregon mediante la contaminazione di insalate con salmonella [ 6 ].
Gli attuali test di identificazione microbica non sono abbastanza veloci
I modelli teorici e l'esperienza delle lettere contaminate hanno dimostrato che la rapidità di intervento dopo un attacco biologico contribuisce a ridurre significativamente la morbilità e i costi legati a questi atti terroristici [ 7 ]. Sfortunatamente, il panico e il caos causati dagli allarmi dell’autunno 2001 hanno dimostrato che il nostro sistema sanitario pubblico non era preparato ad affrontare gli attacchi che utilizzano armi biologiche. Questa osservazione rivela solo i limiti dell’attuale diagnosi microbiologica. Infatti, ancora oggi l’identificazione di un batterio richiede dalle 36 alle 72 ore. Tuttavia, l’identificazione dei microrganismi in meno di un’ora potrebbe rivelarsi un’arma efficace contro il bioterrorismo [ 8 , 9 ]. Infine, occorre trovare un’alternativa alla coltivazione di agenti patogeni pericolosi, che comporta rischi per il personale dei laboratori clinici [ 10 ] e richiede strutture specializzate.
Le nuove tecnologie molecolari, come la PCR in tempo reale ( reazione a catena della polimerasi ), consentono ora di diagnosticare le infezioni in meno di un’ora, direttamente dal campione clinico. Ad esempio, il nostro team ha recentemente pubblicato applicazioni della tecnologia PCR in tempo reale per l’identificazione, in meno di 45 minuti, di donne portatrici di streptococco di gruppo B al momento del parto [ 11 , 12 ] e per il rilevamento rapido della tossina Shiga -produzione di E. coli direttamente dalle feci [ 13 ]. Questi test sono rapidi, sensibili, specifici e onnipresenti. La velocità è garantita combinando un metodo rapido (≤ 10 minuti) di preparazione del campione con un dispositivo PCR in tempo reale che consente una rapida amplificazione del DNA e la misurazione ad ogni ciclo di un segnale fluorescente specifico per l'amplicone ricercato.
La sensibilità dei nostri test è generalmente inferiore a 10 copie del DNA target per reazione PCR. La specificità viene valutata testando una batteria di ceppi che coprono i rami principali dell'albero filogenetico batterico, con una maggiore rappresentanza di specie vicine a quelle target. L'ubiquità del test PCR viene valutata testando diversi ceppi della specie target, originari di diverse regioni del globo e rappresentativi della diversità genetica di questa specie. Infine, poiché l'amplificazione e la rilevazione del prodotto della PCR vengono effettuate nella stessa provetta che viene aperta una sola volta all'inizio del test, le possibilità di contaminazione da parte di ampliconi precedentemente ottenuti sono minime. Mentre i test PCR tradizionali richiedono fino a cinquanta passaggi tecnici, queste nuove tecnologie consentono di ridurre il numero di manipolazioni a meno di dieci.
La preparazione dei campioni pone sfide particolari a causa della diversità dei tipi di campioni clinici in cui è possibile rilevare i batteri. Solo per i batteri di categoria A, ci sono più di una mezza dozzina di fluidi biologici che devono essere campionati, per non parlare delle numerose fonti ambientali che sarebbe utile poter valutare. Sono attualmente in fase di sviluppo sistemi microfluidici automatizzati, versatili e integrati con la PCR per svolgere questo delicato compito in pochi minuti [ 14 ].
Scelta del target per la diagnosi molecolare
L'identificazione molecolare di un agente patogeno si basa sulla rilevazione di un gene bersaglio (Figura 1) che deve poter essere collegato in modo specifico a tutti i rappresentanti della specie microbica ricercata. Tradizionalmente, il gene che codifica per l'RNA ribosomiale 16S è stato maggiormente utilizzato per questo compito. Per questi scopi possono essere utilizzati anche altri geni evolutivamente conservati, come tuf, recA, atpD, groE e dnaK [ 9 ]. Se inoltre questo gene conservato è essenziale per la sopravvivenza dei batteri, la possibilità di avere falsi negativi con organismi geneticamente modificati è ridotta al minimo. D'altra parte, questi geni conservati non sempre permettono di distinguere i ceppi virulenti da quelli avirulenti. È il caso ad esempio del B. anthracis che deve avere due plasmidi, pOX1 e pOX2, per provocare l'antrace. L'analisi dei geni di virulenza di questi plasmidi ha permesso di determinare che il fallimento degli attacchi biologici della setta Aum in Giappone era dovuto all'uso di un ceppo vaccinale non virulento [ 15 ]. Inoltre, prendendo di mira i geni necessari per la patogenesi, è possibile identificare potenzialmente il trasferimento di questi fattori di virulenza ad altre specie. L'individuazione dei geni che conferiscono resistenza agli antibiotici garantirebbe una scelta terapeutica ottimale, tanto più importante dal momento che i ricercatori sovietici hanno creato un ceppo di Yersinia pestis capace di resistere a più di 16 diversi antibiotici [ 16 ]. La diversità dei geni di resistenza pone limiti che dovranno essere risolti attraverso l’uso di tecnologie future che consentano l’analisi simultanea di più bersagli genetici. Le possibilità di manipolazione genetica, anche di geni essenziali come quello dell’RNA ribosomiale 16S [ 17 ], ci dicono che l’analisi di bersagli multipli e persino di interi genomi è la via del futuro.
Tipologie di bersagli genetici che consentono l'identificazione di armi batteriologiche. Prendendo di mira un gene essenziale (in verde) per la sopravvivenza dei batteri, si ottimizzano le possibilità di individuare tutti i rappresentanti della stessa specie, mentre si riducono i rischi di avere falsi negativi con ceppi geneticamente manipolati. Il rilevamento simultaneo dei geni necessari per la virulenza (in rosso) garantisce l'identificazione di ceppi patogeni e potrebbe fornire informazioni sul trasferimento di questi geni di virulenza ad altre specie. L'identificazione dei geni di resistenza (in arancione) viene utilizzata per guidare l'intervento terapeutico. Infine, il rilevamento simultaneo di bersagli situati su diversi elementi genetici – cromosoma/i (linea nera) o plasmide/i (linea blu) – fornisce informazioni su potenziali riarrangiamenti genetici dell’agente patogeno.
Un test rapido per Bacillus anthracis
Abbiamo dimostrato l'efficacia del nostro approccio per la selezione del bersaglio sviluppando un test molecolare rapido per l'identificazione del Bacillus anthracis [ 18 ]. L'analisi della sequenza dei plasmidi pOX1 e pOX2 di diversi ceppi di B. anthracis ha permesso di scegliere sequenze conservate nei geni essenziali per la virulenza. L'analisi delle sequenze genetiche cromosomiche essenziali ha identificato un polimorfismo esclusivo di B. anthracis . Abbiamo sviluppato un test PCR rapido (< 1 ora) che identifica simultaneamente in modo fluorescente sia i bersagli plasmidici che un gene cromosomico di B. anthracis . Questo test ha consentito il rilevamento sensibile, specifico e ubiquitario di cellule vegetative e spore di B. anthracis aggiunte a diversi tipi di campioni biologici. La sensibilità analitica del test utilizzando tamponi nasali inoculati con B. anthracis è inferiore a 10 unità formanti colonie per reazione PCR. La tecnologia utilizzata nello sviluppo di questo test dovrebbe essere adattata ad altri agenti biologici.
Veduta
Per parafrasare La Fontaine, non moriremo tutti, ma tutti saremo colpiti, in misura diversa, dagli eventi dell'autunno 2001. L'urgente necessità di rispondere alla minaccia delle armi batteriologiche ci costringe a migliorare i mezzi diagnostici sperimentali esistenti per portare nell'applicazione clinica il più rapidamente possibile. D'altro canto riteniamo altrettanto importante riuscire a diagnosticare tutte le infezioni in meno di un'ora, così da fornire al clinico contemporaneamente i risultati microbiologici e le analisi biochimiche, ematiche e radiologiche. Il medico potrà allora formulare una diagnosi non in maniera presuntiva, come troppo spesso è obbligato a fare oggi, ma una diagnosi basata finalmente sulle prove ottenute in laboratorio. Si prevede che ciò rivoluzionerà la pratica medica, poiché il trattamento delle malattie infettive si baserà sulla precisa identificazione dell’agente patogeno e dei geni di resistenza nel momento in cui il medico visita il paziente. Questi test di identificazione in tempo reale non dovrebbero solo promuovere una terapia ottimale, ma anche contribuire a ridurre l’impatto della resistenza microbica [ 8 ]. Chiamiamo questa fusione di diagnosi e terapia teranostica molecolare [ 9 ].
Grazie
Vorremmo ringraziare Natalie Clairoux, Éric Leblanc e François J. Picard per i loro commenti penetranti. Il team di diagnostica molecolare CRI è supportato dalla sovvenzione PA-15586 del Canadian Institutes of Health Research and Infectio Diagnostics (IDI) Inc.
Riferimenti
Redmond C, Pearce MJ, Manchee RJ, Berdal BP. Reliquia mortale della Grande Guerra. Natura 1998; 393:747–8. [Google Scholar]
Christopher GW, Cieslak TJ, Pavlin JA, Eitzen EM, Jr. Guerra biologica. Una prospettiva storica. JAMA 1997; 278: 412–7. [Google Scholar]
Montplaisir S. Bioterrorismo: è giunto il momento solo del Bacillus anthracis ? Selezioni Medicina/Scienza 2001; 19:10–3. [Google Scholar]
Rotz LD, Khan AS, Lillibridge SR, Ostroff SM, Hughes JM. Valutazione della salute pubblica di potenziali agenti di terrorismo biologico. Emerg Infect Dis 2002; 8:225–30. [Google Scholar]
Sobel J, Khan AS, Swerdlow DL. Minaccia di un attacco terroristico biologico all'approvvigionamento alimentare statunitense: la prospettiva del CDC. Lancetta 2002; 359:874–80. [Google Scholar]
Torok TJ, Tauxe RV, Wise RP et al. Una vasta epidemia di salmonellosi nella comunità causata dalla contaminazione intenzionale delle insalate dei ristoranti. JAMA 1997; 278: 389–95. [Google Scholar]
Kaufmann AF, Meltzer MI, Schmid GP. L’impatto economico di un attacco bioterroristico: sono giustificabili programmi di prevenzione e intervento post-attacco? Emerg Infect Dis 1997; 3:83–94. [Google Scholar]
Boissinot M, Bergeron MG. Verso una diagnosi molecolare rapida e in tempo reale per guidare l’uso intelligente degli antimicrobici. Curr Opin Microbiol 2002; 5:478–82. [Google Scholar]
Picard FJ, Bergeron MG. Teranostica molecolare rapida nelle malattie infettive. Scoperta della droga oggi 2002; 7:1092–101. [Google Scholar]
Shapiro DS, Schwartz DR. Esposizione di operatori di laboratorio a Francisella tularensis nonostante una procedura di bioterrorismo. J Clin Microbiol 2002; 40:2278–81. [Google Scholar]
Bergeron MG, Ke D, Menard C, et al. Individuazione rapida degli streptococchi di gruppo B nelle donne in gravidanza al momento del parto. N inglese J Med 2000; 343: 175–9. [Google Scholar]
Ke D, Menard C, Picard FJ et al. Sviluppo di test PCR convenzionali e real-time per la rilevazione rapida di streptococchi di gruppo B. Clin Chem 2000; 46:324–31. [Google Scholar]
Belanger SD, Boissinot M, Menard C, Picard FJ, Bergeron MG. Rilevamento rapido dei batteri che producono la tossina Shiga nelle feci mediante PCR multiplex con fari molecolari sul termociclatore intelligente. J Clin Microbiol 2002; 40: 1436–40. [Google Scholar]
Taylor MT, Belgrado P, Furman BJ, et al. Lisi di spore batteriche mediante sonicazione attraverso un'interfaccia flessibile in un sistema microfluidico. Chimica Anal 2001; 73: 492–6. [Google Scholar]
Keim P, Smith KL, Keys C, et al. Indagine molecolare sul rilascio di antrace di Aum Shinrikyo a Kameido, in Giappone. J Clin Microbiol 2001; 39:4566–7. [Google Scholar]
Niiler E. Bioterrorismobiotecnologia in soccorso? Nat Biotecnologie 2002; 20:21–5. [Google Scholar]
Asai T, Zaporojets D, Squires C, Squires CL. Un ceppo di Escherichia coli con tutti gli operoni rRNA cromosomici inattivati: scambio completo di geni rRNA tra batteri. Proc Natl Acad Sci USA 1999; 96:1971–6. [Google Scholar]
Leblanc E, Vaillancourt M, Boissinot M, et al. Rilevamento in meno di un'ora delle spore di Bacillus anthracis e delle cellule vegetative da campioni clinici mediante PCR basata sulla fluorescenza. ASM, 102a assemblea generale. Salt Lake City, Utah: ASM, 2002. [Google Scholar]
Elenco dei dipinti
Proprietà delle armi batteriologiche, elencate dalla minaccia più alta (+++) alla minaccia più bassa (–). PD: potenziale di produzione e rilascio in quantità sufficienti a colpire una vasta popolazione, determinato in base alla disponibilità, ai requisiti di coltivazione, alla via più probabile di infezione e alla stabilità ambientale; PP: trasmissibilità da persona a persona; O si; N: no; E: in corso. 1. Percezione pubblica della pericolosità di queste infezioni; 2. Livello di preparazione speciale richiesto dai laboratori di sanità pubblica per affrontare queste infezioni; 3. Categoria di priorità secondo i CDC ( centri per il controllo delle malattie ). A: agenti con il potenziale più dannoso; B: agenti con potenziale significativo ma percepiti come più semplici da controllare; C: agenti emergenti; 4. Struttura minima richiesta per fungere da arma biologica completamente virulenta (adattato da [ 4 ])
Lista delle figure
Tipologie di bersagli genetici che consentono l'identificazione di armi batteriologiche. Prendendo di mira un gene essenziale (in verde) per la sopravvivenza dei batteri, si ottimizzano le possibilità di individuare tutti i rappresentanti della stessa specie, mentre si riducono i rischi di avere falsi negativi con ceppi geneticamente manipolati. Il rilevamento simultaneo dei geni necessari per la virulenza (in rosso) garantisce l'identificazione di ceppi patogeni e potrebbe fornire informazioni sul trasferimento di questi geni di virulenza ad altre specie. L'identificazione dei geni di resistenza (in arancione) viene utilizzata per guidare l'intervento terapeutico. Infine, il rilevamento simultaneo di bersagli situati su diversi elementi genetici – cromosoma/i (linea nera) o plasmide/i (linea blu) – fornisce informazioni su potenziali riarrangiamenti genetici dell’agente patogeno.
Scarica questo articolo in formato PDF
Contenuto dell'articolo
Collegamenti al database
Metrica
Mostra le metriche degli articoli
Servizi
Articoli questo articolo cita l'articolo
CrossRef (3)Stessi autori
- Google Scholar - Database di scienze EDP - PubMed
articoli Correlati
I chip di DNA rivoluzioneranno l’identificazione dei batteri?
Med Sci (Parigi) 2005; 21: 539–544
Progresso scientifico e nuove armi biologiche
Med Sci (Parigi) 2006; 22: 206–211
L'insospettata diversità del mondo microbico
Med Sci (Parigi) 2005; 21:290–296
Segnalibri
medicina/scienza
Redattore capo: Anna Salvetti - Vicedirettore capo: Thierry Jouault
Redattore capo: François Flori - Redattore associato: Jean-Pierre Hardelin - Comitato di redazione
ISSN: 0767-0974 - eISSN: 1958-5381
© medicina/scienze - Inserm
Tutti i diritti riservati
Home Tutti i numeri Volume 19 / No 10 (ottobre 2003) Med Sci (Parigi), 19 10 (2003) 967-971 Full HTML
.